早皇后甜瓜无菌系的初步建立

早皇后属早熟甜瓜品种，生长势较强，第1雌花着生在主蔓第3节的子蔓上，以后每节出现1朵雌花。全生育期84d，果实发育期38~40d。果实椭圆形，果皮金黄色覆浅隐绿条斑，网纹细密，外观美；果肉橘红色，肉质细松，多汁，中心可溶性固形物13%~14%，最高可达16％；单果质量3~4kg，耐贮运；种子黄白色、卵形、中等偏大，单瓜种子数量450粒左右，千粒质量70g。早皇后优良的商品性状一直受到人们的青睐，已成为甜瓜育种者的研究目标之一。转基因技术的出现，使得丰富其优良性状成为可能。建立一套完整高效的再生体系成为其转基因的前提。有关甜瓜再生体系和无菌系建立的研究报道很多。目前，无菌系的建立大都通过种子去壳，75%酒精浸泡30~60s，0.1%升汞消毒5min左右，无菌水清洗3~4次，滤纸吸干，然后将种子接种到MS培养基上。建立一套完整高效的再生体系，首先要建立高效的无菌系，旨在为再生体系的建立提供大量的材料。可见，建立一套完整高效的早皇后甜瓜无菌系成为首要亟待解决的问题。

1材料与方法

1.1材料

早皇后甜瓜种子由新疆维吾尔自治区葡萄瓜果开发研究中心提供。

1.2方法

1.2.1不同种子处理方式

将早皇后甜瓜种子，采用不去壳、嗑缝和去壳3种处理方式，在超净工作台内消毒。先将种子在75%的酒精中浸泡1min，再用15%NaClO浸泡30min，无菌水冲洗3~4次，滤纸吸干水分，最后接种到MS培养基上。每个处理6瓶，每瓶2粒。观察并记录其生长状况。

1.2.2不同NaClO浓度

种子去壳，在75%酒精中浸泡1min，分别用2.5%、5%、10%和15%NaClO浸泡30min，无菌水冲洗3~4次，滤纸吸干水分，最后接种到MS培养基上。每个处理5瓶，每瓶2粒。观察并记录其生长状况。

1.2.3不同培养基

种子去壳，在75%酒精中浸泡1min，用15%NaClO浸泡30min，无菌水冲洗3~4次，滤纸吸干水分，最后接种到MS、MS+BA0.3mg·L-1、MS+BA0.5mg·L-1和MS+BA1.0mg·L-14种培养基上。每个处理6瓶，每瓶2粒。观察并记录其生长状况。

2结果与分析

2.1不同种子处理方式对无菌苗生长的影响

表1接种5d后的调查结果显示，种子去壳，子叶、下胚轴和根均长出。嗑缝的种子，有部分长出子叶。不去壳的种子，未脱壳，没有萌发。可见，种子去壳，有利于无菌苗的快速生长。

2.2不同NaClO浓度对无菌苗生长的影响

表2结果表明，15%NaClO处理，种子均未污染，生长势强。2.5%、5%和10%NaClO处理，种子均有污染，且5%NaClO处理，种子生长势弱。可见，15%NaClO处理种子，有利于无菌苗的大量获得和快速生长。

2.3不同培养基对无菌苗生长的影响

表3结果表明，种子接种到MS培养基上，无菌苗根和下胚轴均细长，子叶嫩绿。添加BA0.3mg·L-1的MS培养基，无菌苗根粗，下胚轴细而短，子叶深绿。添加BA0.5mg·L-1和1.0mg·L-1的MS培养基，无菌苗均表现出根和下胚轴粗短，子叶深绿，畸形苗多。可见，种子接种到MS培养基上，有利于无菌苗快速大量的获得。

表3不同培养基无菌苗生长情况比较

3讨论和结论

甜瓜果实营养丰富，是一种色、香、味俱佳的重要世界性水果。我国是甜瓜重要起源地之一，生产历史悠久，是现今世界甜瓜资源大国，也是生产和出口大国。甜瓜含有丰富的矿物盐和多种维生素，为夏天主要果蔬，被作为一种高产值的经济作物在世界各地广泛种植。当今世界甜瓜育种的主要目标是抗逆（抗病、耐低温弱光湿热等）、优质和高产育种。生物技术的应用大大提高了育种效率。甜瓜转基因一直是甜瓜育种工作者的主要研究目标之一，而转基因的前提是建立一套完整的甜瓜再生体系，首先需要建立无菌系，从而获得大量无菌苗，为其提供充足的材料。

种子外壳对种子萌发有阻力，妨碍无菌苗的生长，去壳可以去除阻力。适宜的NaClO浓度可以彻底进行表面消毒，减少污染程度。种子中有激素，适宜的激素浓度有利于幼苗生长。本试验结果表明，用15%NaClO对去壳的种子进行表面消毒，然后将其接种到MS培养基上，有利于快速大量获得早皇后甜瓜无菌苗，同时也是建立早皇后甜瓜无菌系的最佳方法。