北虫草菌种人工分离的研究

耕种帮解答：

1材料与方法

1.1材料试剂与仪器

1.1.1供试菌株

沈阳棋盘山野生的蛹虫草菌株。

1.1.2培养基

马铃薯100g、葡萄糖10g、牛肉膏5g、KH2PO40.5g、MgSO40.25g、琼脂10g，加蒸馏水至500mL，煮沸使琼脂完全融化，高压蒸汽灭菌121℃，30min。

1.1.3试剂

75％酒精，无菌水。

1.1.4主要仪器

手提式压力蒸汽灭菌锅、分析天平、超净工作台、HPX-9082MBE数显电热培养箱，其他常用玻璃仪器等。

1.2试验方法

1.2.1不同的组织部位分离方法比较

（1）子实体分离法

在超净工作台上将虫草子实体用75%酒精浸泡1min，无菌水冲洗3次，再用小刀分别切取子实体顶端、中部、根部，然后接种到斜面培养基上，18℃恒温培养15d。观察不同组织部位对北虫草萌发天数、长势、满管时间的影响[1]。

（2）孢子分离法

上述方法洗涤得到的子实体，用小刀切取尖端，悬挂在三角瓶棉塞下端的不锈钢弯钩上，通过悬挂虫草子实体，使顶端朝下，散落下来的孢子落在培养基上，从而继续生长，并产生白色菌丝。在培养的前期，要保证室温不能过高，因此本试验在培养时，将三角瓶置于充满凉水的盆中，并需要每天换水，维持较低的水温。在18℃恒温培养5d后，无菌条件下取出子实体尖端，将三角瓶放回，继续培养10d[2]。

1.2.2不同的消毒方式比较

以子实体顶端为例，处理方法见表1。

接种到斜面培养基上，18℃恒温培养15d。观察不同消毒方式对北虫草萌发天数、长势、满管时间的影响。

1.2.3继代培养试验

挑选长势好的分离菌种，接种到玻璃瓶中，将玻璃瓶放入培养室培养。

2结果与分析

2.1组织分离法分离北虫草菌种的研究

2.1.1不同组织部位对北虫草萌发天数的影响

通过对同一株北虫草分别切取顶端、中端和根部，采用相同的消毒方式进行除菌。可以看出，在培养的最初阶段，在培养顶端和中端部位的试管中，北虫草两端均有白色菌丝生长，而在培养根部部位的试管中，没有白色菌丝生长（图1）。

2.1.2不同组织部位对北虫草长势的影响

匍匐型菌丝的有无可作为判定菌种优劣的依据，其量越多，菌种质量越优[3]。随着培养时间的延续，在培养3种不同北虫草部位的试管中，均产生了白色菌丝，长势上并没有出现差异。

2.1.3不同组织部位对满管时间的影响

经过若干天的培养，3种不同部位的北虫草菌丝体并未出现明显的满管现象。

2.1.4孢子分离法分离北虫草菌种的研究

孢子分离法培养前期如图2-A，培养2d后，培养基上已有少量的菌丝生成（图2-B），培养5d后，培养基上已经形成了大量的菌丝（图2-C）。此时，在无菌条件下取出子实体，继续培养10d。从萌发时间和长势上看，孢子分离法分离得到的菌株品质更优。