| 一、葡萄嫩梢采集与消毒 将大树或扦插苗长出5—7片叶的嫩梢，取5—10厘米长，去掉幼叶。用自来水冲洗3—5分钟，在70％酒精中浸泡30—40秒钟，用蒸馏水冲洗2—3次，再放入0.5％氯化汞溶液中消毒7一10分钟，最后用无菌水冲洗5—6次后备用。 二、培养基制作与筛选 (一)茎尖培养 方1 1／2ms培养基+6—苄基嘌呤(6—ba)0.5一lppm个荼乙酸(naa)0.01ppm+水解乳蛋白(lh)100ppm+蔗糖2％+琼脂0.6％配制，氢离子浓度调到1585纳摩／升[ph5.8)。在98.06千帕的压力下，高压灭菌20分钟，冷凉待用。山东酿酒葡萄研究所用此方对白羽、红香蕉、白友谊、雷司令等品种茎尖培养成活率达83.5％以上。 方2 1／2ms培养基+赤霉素(ga)0.1ppm+吲哚乙酸(1ba)0.59pm+6-节基嘻吟lppm+激动素(kt)0.5ppm+硫酸腺嘌呤(ade)4ppm+琼脂0.6％+蔗糖0.2％的培养基，对康拜尔芽变(康太)成活较好(辽宁省农科院植保所)。 (二)茎叶分化培养 方1 1／2ms培养基+赤霉素1ppm+吲哚丁酸0.5ppm+6-节基膘吟1ppm+蔗糖2％+琼脂0.6％，氢离子浓度调到1000纳摩／升(ph6.0)。在98.06千帕高压下灭菌20分钟后备用。辽宁省农业科学院植保所对贝达、红富土、黑奥林、巨峰品种族种成活率达90％以上。 方2 用b5大量元素培养基+ms培养基其他元素+吲哚乙酸(1aa)0.01—0.1ppm+6-苄基嘌呤0.02—0.59pm+腺嘌呤(a)2；ppm或水解乳蛋白1000ppm+蔗糖2％—3％+琼脂0.7％，氢离子浓度630.9—1585纳摩／升(ph5.8—6.2)，配好后装入三角瓶中，用两层硫酸纸封口，在98.06—117.67千帕的高压锅中灭菌20分钟，冷凉待用。河南省园艺所用此配方对京早晶品种接种成活效果较好。 (三)幼根分化培养 方1 用bs大量元素培养基+蔗糖4％+吲哚乙酸1ppm+6-苄基嘌呤0.08ppm+琼脂7％，氢离子浓度1000纳摩／升(ph6)，经高压灭菌20分钟，冷凉备用。辽宁省农业科学院植保所用此配方对红富士、黑奥林、巨峰等品种茎尖培养的单芽段，插入灭菌后的三角瓶培养基中，芽痕高于培养基面3.5毫米，每瓶插入1—3个茎段，插后在黑暗中培养48小时；再转入间歇光照(两支40瓦日光灯下，每天光照10小时)培养，温度保持在23—28℃，20天后幼根平均长分别为99.0，86.3，78.0毫米。 方2 用1／2ms培养基+蔗糖4％+吲哚乙酸0.4ppm+6-苄基嘌呤0.06ppm+琼脂7％，氢离子浓度1000纳摩／升(ph6)，经过高压灭菌后接种贝达、红宫土、黑奥林、臣蜂，20天后幼根平均长分别为94.0，36.5，16.8，50.8毫米。此培养基对贝达繁殖有较好效果(辽宁省农科院植保所)。 三、接种(茎段试管培养) 在超净工作台上，将彻底消毒过的备用嫩枝剪截2厘米核的单芽茎段，将其下部插入灭菌后的试管培养基中，芽痕高于培养基面3—5毫米，每管插1—3个茎段，在黑暗处培养48小时，再转入间歇光照(两支40瓦日光灯下，每天照10个小时)培养，温度保持在25—28℃，以后光照时间每天可延长12—14小时，光照强度为2000—2500勒。 四、继代培养 将试管苗剪成带叶单芽段，不必消毒，插人培养基中，一般10一15天开始生根，30—35天可长成5.6片叶的小苗，在适宜条件下，1年可繁殖数万株试管苗。 五、炼苗移栽 试管苗长成后移到温室或塑料大绷里，在自然光照下炼苗。要求温度在20—25℃，经两周后将试管塞揭开，使之接受自然光照、温度、湿度锻炼4—5天。用镊子夹叶柄将小苗从培养基中取出，洗去培养基残留物，直接栽入温室或大棚中的小拱棚里的砂壤土或粗砂里，浇透底水。棚内湿度保持在90％左右。10厘米下的地温应稳定在15℃左右，光照为4000—5000勒。15—20天后见幼叶变绿时，即可移植到大田，成活率达80％以上。如棚内温度过高，要通风和盖苇帘遮荫降温，喷洒凉水，提高棚内空气湿度和土壤湿度，以保持炼壮苗的适宜条件。    |
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