根据菌株的生理生化特性和遗传稳定性,人工创造有利于休眠的环境,保存其优良特性,以备日后重复应用。菌种保藏的基本原理是采用干燥·低温·冷冻·空气隔绝·缺乏营养·应用保护剂或酸度中和剂等技术,降低细菌的代谢率,停止繁殖,促使生命进入休眠状态,延长保藏时间,从而达到不死·不灭·不乱·不杂的目的。最近有种植灵芝的网友问我们:如何保存灵芝菌种?灵芝菌种有几种保存方法?灵芝菌种保存的适宜温度是多少?灵芝菌种保存需要注意什么?下面简单介绍一下我们的种植网,供网友参考。
灵芝菌种低温斜面保藏法
即冰箱试管法,它是利用低温能抑制菌丝生长的原理,将斜面菌种保存在4~6的冰箱中,必要时将其移植到新鲜斜面上,培养后再放入冰箱中。这种重复保存法属于连续保存法的范畴。
使用糯米粉糖琼脂培养基或马铃薯综合培养基,为防止产酸,应少加或不加糖,但要加碳酸钙等缓冲液。同时,每升培养基中要添加10毫克维生素B1,琼脂的量要增加到2.5%。棉塞穿入管内3 cm左右,要求密实。灭菌后制成半高斜面。
放在30左右的斜面上2-3天做空白试验。确认无菌后,接种一小块灵芝菌种,放入25左右稍低的温度中培养,使菌丝长得粗壮饱满,菌丝布满斜面。包扎后放入4-6冰箱保存,并记录菌名·培养基·日期·存放方位,然后每3-4个月转管一次。
在保存过程中,冰箱的相对湿度应保持在40%~50%,尽量少用冰箱,避免冷凝水和污染。必须用的时候,要开·拿·关,力求短平快。
灵芝菌种隔绝空气保藏法
经常用矿物油和胶塞封闭斜面,以减少水分蒸发,防止培养基干涸,避免菌丝死亡。同时,在空气和缺氧的隔离下,菌丝的新陈代谢降低,生长繁殖受到抑制,从而达到保存的目的。
选择100 ml化学纯液体石蜡,放入250 ml锥形瓶或盐水瓶中,加棉塞,0.103 MPa灭菌30-60分钟,然后放入160烘箱1-2小时或40培养箱3天。可以看到瓶中的液体石蜡清澈透明,液层没有白膜,即没有水。然后在无菌条件下,将液体石蜡倒入试管斜面上的菌种中,高出斜面顶部约1厘米。最后,直立起来,在干净的室温下储存。
移管时,直接用接种刀切开一小块块菌苔,移至新鲜斜面中心,28培养,多余的菌种仍保存在原液体石蜡中。由于保存的菌丝中有石蜡,生长缓慢无力,需要再次转移才能使用。
注意保存的地方要干燥,防止卫生棉条受潮发霉;斜面露出液面的地方,要及时加入液体石蜡。该方法保存时间可达一年以上,效果良好。
灵芝菌种液体保藏法
1.生理盐水的保存:称取0.7 ~ 0.9g医用氯化钠,放入100ml蒸馏水中,混匀,置于试管中,每支5ml,加棉塞,灭菌。用无菌滴管吸取液体培养的菌丝球或菌丝片,转移到试管中,每管约5个(菌丝片),用无菌橡皮塞盖好,保存在冰箱中
以上两种方法配制好后,在室温或4~6冰箱中直立保存,中途加入无菌生理盐水和蒸馏水。使用时,将菌种块或孢子悬液从试管中取出,移至新的斜面,塞住原试管并保存。
灵芝菌种天然基质保藏法
这种方法取材容易,制作简单,邮寄携带方便,效果好,在生产实践中经常使用。
1.木屑保存:用木屑麸皮培养基,放入23cm 200mm厚的试管中(一般试管也可),装载量约为管长的2/3,加0.137mpa棉塞,保持高压灭菌1.5h.无菌条件下接种,28培养,待菌丝长满试管后更换无菌胶塞,4~6冰箱保存。使用时,选择少量底物,移至新鲜斜面,28培养。
2.乌拉尔甘草的保存:从中药店买几个粗壮的乌拉尔甘草,用清水浸泡后,对角和纵向切成两个斜面,装入相应粗细的试管中,加棉塞,保持灭菌1.5小时。在无菌条件下,转移一小块待保存的灵芝菌种,放在甘草斜面上。菌丝长满后,要继续培养一周。更换无菌胶塞,保存在4~6冰箱中。使用时,直接从斜面上挑取菌丝进行嫁接。也可以把斜面切成薄片转移。
另外,常用的还有真空冷冻干燥和液氮冷冻保存,这是目前最先进的菌种保存方法,但程序复杂,需要一定的仪器设备,所以我赢了& amp#039;这里就不介绍了。至于用滤纸和沙管干燥保存孢子,灵芝孢子的发芽率并不是很高,随着时间的推移就更低了。除了上面对液体保存的简单介绍,这里就不赘述了。
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