树莓优良品种快速繁殖技术

　　树莓属蔷薇科悬钩子属多年生灌木，为寒温带小浆果，有较强的适应性，栽培比较简单粗放，管理容易。定植第2年即可结果，第3年进入盛果期，此后可丰产、稳产达15～20年。一般品种产量大约在15 000 kg/ h㎡左右。树莓含有多种维生素，其中维生素C的含量是苹果的5倍、葡萄的6倍。维生素E含量为水果之首，SOD、氨基丁酸等抗衰老，抗癌防癌物质含量丰富，根茎叶也具有药用功效。由于树莓营养价值高，速冻出口销路好，因此成为一种正在大力开发栽培的新兴果树，被称为“第三代水果”。国际市场上树莓浆果主要用于加工，被加工成果汁、果酱、果酒、果冻、口香糖及各种食品的添加剂、添色剂等，国内零星栽培时有用于制汁、制酒，也有用于鲜食的，是一种待开发的天然保健果品和药品资源。树莓分红莓和黑莓2大系列，是当今风靡世界的第3代水果中的佼佼者，由于它的维生素E、SOD、氨基丁酸等抗衰老物质含量都高于现有水果及其他野果，特别是红莓的抗癌物质鞣化酸含量丰富，欧美称之为“红宝石”。试验主要以美国选育的黑树莓品种‘三冠王’和红莓品种‘红莓38’为材料，对其初代培养、继代培养、生根培养以及炼苗和移栽等一系列问题进行系统研究，探讨适合黑莓‘三冠王’和‘红莓38’组培的最佳培养基类型、炼苗和移栽方式，为加快实现树莓优良品种种苗大规模工厂化生产奠定基础，为试管苗工厂化生产提供技术依据。

　　1 供试材料

　　笔者从河南省新乡市封丘县留光乡青堆村树莓专业合作社—树莓种植基地的地栽树莓品种黑莓‘三冠王(Triplecrown)’和红莓‘红莓38号’的母株上，取生长健壮的枝条为外植体。这2个品种适宜在我国华中、华北、西北等地栽培，其材料引自中国林业科学研究所。

　　2 外植体取材

　　我们于2008年7月16日，在河南省新乡市封丘县留光乡青堆村树莓种植基地选生长健壮的无病虫害母株，剪取生长力较强的茎段、茎尖去除大叶，装入塑料袋带回室内保湿保存。

　　3 培养基的配制

　　整个培养过程中采用MS为基本培养基。在外植体的不同发育阶段分别添加不同种类和浓度的植物激素、蔗糖3. 0%、pH值5. 6～5. 8、琼脂粉4. 0～4. 5 g/ L固化，分装后在121℃条件下灭菌20 min，放置备用。其中：(1)诱导腋芽生长培养基为MS+ 6- BA 1. 0 mg/ L+ IBA 0. 1 mg/ L;(2)继代增殖培养基为MS+ 6- BA 1. 5 mg/ L+ IBA 0. 03 mg/ L;(3)生根培养基为1/ 2 MS+ IBA 0. 2 mg/ L+ 活性炭0. 2%。

　　4 无菌系的建立

　　将去除叶片的茎段、茎尖在自来水下冲洗约30 min，除去表面污染物，在超净工作台上用刀片去掉茎段上的刺和绒毛，放入大烧杯中，先用75%酒精浸泡15～20 s，再用0. 1%升汞溶液消毒15 min，最后用无菌水漂洗5次，无菌滤纸吸干水分。将消毒好的外植体放入无菌瓶中接种备用。此阶段主要解决灭菌、防止污染问题，可以通过各环节严格操作和将母株用杀菌剂处理后再取材等措施提高灭菌效果。

　　5 诱导腋芽生长

　　将消毒好的树莓外植体，首先去除两端切口与消毒液接触部分少许，然后将其切割成带有1个腋芽的小段，接种于腋芽诱导培养基MS+ 6- BA 1. 0 mg/ L+ IBA 0. 1 mg/ L上进行培养。培养室温度(26±2)℃，光照强度1 000～2 000 lx，每天光照12 h。5 d后，腋芽开始萌动生长，经过15 d左右的培养，外植体全部萌动，并膨大、伸长，芽苗生长快的可达1. 5～2. 0 cm，基部产生少量愈伤组织。20～25 d嫩茎达4～5 cm时，切成带有1～2个芽的茎段，转接于新鲜的腋芽诱导培养基上继代培养。10 d后，长出嫩茎，基部产生少量愈伤组织，并开始出现丛生芽，每一个外植体2～7个不等，20 d后，芽苗长4 cm。

　　6 继代培养

　　将萌发长成苗的腋芽切割下，接种于继代增殖培养基MS+ 6- BA 1. 5 mg/ L+ IBA 0. 03 mg/ L上，一般30 d 后可长出丛生芽，继代周期为35～50 d，增殖倍数5～7倍。要获得试管繁殖的高效率，植物激素配比是重要因素。为了确定较佳的第一作者简介：郭玉霞(1980-)，女，助理研究员;从事果树与激素配比，我们配置了以MS为基本培养基，另加植物激素的几种不同激素浓度的培养基。在试验过程中发现，6- BA/ IBA比值越大越有利于芽分化。结果显示，试验所采用的诱导培养基芽分化虽然较少，但分化的芽都为有效芽。最终筛选出此培养基为最佳的继代增殖培养基。此外还发现，在继代培养的接种操作时，切去嫩茎的顶芽后，再转接于新鲜培养基上，对嫩茎增殖有很大的促进作用。树莓品种不同，在相同激素水平、相同条件下的生长有很大差异。因此在树莓用于工厂化组培生长中，不需要盲目追求过高的分化系数，而要求最佳成苗数，因此6- BA浓度不宜超过1. 5 mg/ L。利用树莓组培技术繁殖速度快，苗生长健壮，是树莓优良品种种苗繁殖的主要途径。

　　7 诱导生根

　　继代获得较多的丛生芽后，将长约4～5 cm的芽苗挑出接种于培养基1/ 2 MS+ IBA 0. 2 mg/ L+ 活性炭0. 02%上，进行诱导生根培养。培养条件同前。此期选择整齐一致的无根苗进行生根培养，这对以后成批形成规范化和标准化生产的商品成株至关重要。接种5 d左右，黑莓品种‘三冠王’就可以出现3～4条健壮白根，而‘红莓38’则需10 d左右，芽苗迅速长高具有4～6片叶，即可移栽。在生根培养基中加入0. 2 g/ L活性炭对树莓某些品种嫩茎生根有良好促进作用。

　　8 炼苗移栽

　　在组织培养的过程中，试管苗移栽的成功与否也是一个关键环节，因为试管苗在试管中无论生长多好，移栽若不成功则导致前功尽弃。在试验中，当试管苗具有4～6片叶、5～6条根时即可移栽。移栽前要对试管苗进行通风炼苗，先将生根试管苗拿出培养室，去掉封口膜，使嫩苗逐渐与外界接触，提高适应能力，常温下炼苗3 d后，接着向瓶中加入少量温水，以软化培养基。移栽时用镊子轻轻取出试管苗，将根部培养基冲洗干净，移栽到已消毒的纯砂∶草炭= 1∶1的混合基质中。在处理基质时，用代森锰锌1 000倍液喷雾，充分拌匀后用水淋透，在移栽后的10 d内要注意适当遮阴保湿，然后打开遮阴物，在这之间要及时喷水以保证基质潮湿。试验结果表明：植株移栽成活率为90. 0%以上。