花叶香蒲的组织培养和植株再生

1 材料与方法

　　取花叶香蒲的茎尖和幼嫩心叶，经千分之一升汞常规消毒后，无菌水冲洗干净后，将茎尖逐层剥去叶片至5mm左右大小，心叶取基部，切成1.0cm×1.0cm大小方块，分别接种于各种待试培养基上，置于光环境和暗环境中培养。
　　培养环境温度为25℃，光培养光照时间10小时，光照强度2500LX。

2 结果与讨论

2．1 茎尖培养
　　茎尖在光照培养条件下，6天后开始出现褐化现象，12天可见心叶开始抽生，呈淡黄色，部分茎尖基部开始肿大，18天开始抽生第2片小叶，苗高达3.5cm，在MS+6-BA0.5+NAA0.1和MS+6-BA0.5+NAA0.1。MS+6-A0.5+NAA0.1培养基上部分茎尖基部有愈伤发生，呈黄色，较疏松，25天开始抽生第三片小叶，愈伤长大，无分化；暗培养条件下，8天后开始出现褐化现象，12天可见心叶萌动，15天个别基部有肿大现象，21天抽生第二片小叶，25天在MS+6-BA0.5+NAA0.1培养基上部分分化苗有根发生。
　　从表1可以看到，在附加激素6-BA为0.5~1.5mg/L或KT为0.5~2.0mg/L和NAA为0.1~0.5mg/L范围内，花叶香蒲的茎尖都能成活并正常生长成苗。当6-BA浓度达2.0mg/L，有玻璃化苗发生，而使用KT时，未见玻璃化现象。
2.2 叶片培养
　　从表2可以看到，花叶香蒲叶片培养的褐化情况较为严重，分化率低；使用KT作为附加细胞分裂素和在暗培养的条件下，可部分减轻褐化现象的发生。过高的激素水平虽可促使愈伤的发生，但不利于愈伤的生长，甚至会导致愈伤的褐化死亡，而在低水平激素条件下，愈伤生长缓慢。
　　综上所述，可见花叶香蒲的离体繁殖材料以茎尖为好，在添加适量外源生长激素的情况下可一次成苗，在添加6-BA为0.5~1.5mg/L或KT0.5~2.0mg/L和NAA0.1~1.0mg/L的MS培养基上，离体培养均可获得成功，光照条件能促进茎尖的生长发育，但会加重褐化现象的发生。

表1 不同培养条件下花叶香蒲茎尖培养的分化情况

培养条件

附加激素配比

材料数

污染数

褐化（死亡）数

分化数

分化率（%）

备注

光培养

6-BA2.0+NAA1.0

15

2

6

4

57.1

有玻璃化苗发生

6-BA1.5+NAA0.5

15

0

3

6

50.0

6-BA1.0+NAA0.2

15

2

4

8

72.3

6-BA0.5+NAA0.1

15

5

2

4

50.0

KT2.0+NAA1.0

15

2

0

9

55.6

KT1.5+NAA0.5

15

5

2

5

60.0

KT1.0+NAA0.2

15

3

1

6

62.5

KT0.5+NAA0.1

15

2

1

3

55.6

暗培养

6-BA2.0+NAA1.0

15

1

4

8

25.0

6-BA1.5+NAA0.5

15

1

3

6

80.0

6-BA1.0+NAA0.2

15

0

3

7

58.3

6-BA0.5+NAA0.1

15

4

0

6

55.6

有生根现象发生

表2 不同培养条件下花叶香蒲叶片培养的分化情况

培养条件

附加激素配比

材料数

污染数

褐化（死亡）数

分化数

分化率（%）

备注

光培养

6-BA1.0+NAA0.5

30

12

15

0

0

6-BA0.5+NAA0.5

30

9

13

1

12.5

6-BA0.1+NAA0.2

30

3

13

4

28.5

6-BA0.1+NAA0.1

30

7

15

3

37.5

分化愈伤生长缓慢

KT1.0+NAA0.5

30

7

12

2

18.2

KT0.5+NAA0.5

30

3

8

6

31.6

KT0.1+NAA0.2

30

3

11

3

18.8

分化愈伤生长缓慢

KT0.1+NAA0.1

30

5

5

1

5.0

分化愈伤生长缓慢

暗培养

6-BA0.1+NAA0.5

30

6

14

3

33.3

培养后期愈伤部分死亡

6-BA0.5+NAA0.5

30

7

14

0

0

6-BA0.1+NAA0.2

30

8

11

0

0

6-BA0.1+NAA0.1

30

5

17

2

25.0

分化愈伤生长缓慢

　　此外，本文只对花叶香蒲离体培养作了一个初步的探讨，关于愈伤的培养状况、引起褐化的原因及解决方法等其它方面有待作进一步研究。
作者：林 鸿1 刘锦兰2 张雄胜1 潘宜平1

参考文献

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［2］ 阳承胜.宽叶香蒲人工湿地生态恢复研究［D］. 中山大学硕士学位论文，1999：20~25.
［3］ 周东美，郝秀珍，薛燕，等.污染土壤的修复技术研究进展［J］. 生态环境，2004，13（2）：234~242.
［4］ 李永丽，李欣，李硕，等. 东方香蒲（Typha orientalis Presl）对铅的富集特征及其EDTA效应分析。生态环境，2005，14（4）：555~558.
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