组织培养是先进的无性繁殖方法。取用植物器官或组织的一小部分，脱离母体而加以培养，经过诱导和分化，使它再生成独立的新植株。也称为外植体培养。 早在1902年，德国植物学家哈巴兰特预言：“植物细胞具有全能性，每个细胞都像胚胎细胞那样，可以经过体外培养成为一个完整的植株。”在这个假说指引下，法国科学家戈第勒和诺贝库特用小块的胡萝卜根，于1938年成功地在试管中用培养基培养出愈伤组织。1939年，美国科学家怀特用烟草茎段形成层进行组织培养和继代培养，也获得成功。他们的工作为植物细胞和组织培养技术的发展奠定了基础。1949年，美国斯库格在1960年获得成功的。他利用茎尖培养的目的是想除去兰属植物上的病毒，他得到了无病毒的幼苗。他发现兰属茎尖培养，可逐渐增大而形成类原球茎体，与兰花胚胎正常发育相似、经过分割，重复培养可以大量增殖、按照理论计算，l个外植体在1年之内可产生400万株苗之多。从此，组织培养技术被应用于兰花的繁殖，刀多年来形成了兰花的工厂化、商品化的生产。 目前，兰花的各个部位，各个器官，即根、茎、叶、芽、花序、幼胚等都可以作为外植体进行培养。 组织培养要有必要的设备和比较高的技术措施。首先要有培养室、无菌接种室及各种培养用具、用品等。在培养时要先配制培养基，剥取外植体，然后消毒、接种、转移，最后试管苗移植等，都需要比较复杂和细致的技术。现将组织培养的方法简介如下。 培养基的配制 培养基是用各种不同成分和剂量的元素，加上各种维生素、激素等制成。兰花种类不同，培养基的成分也有所不同。大多数的培养基是用固体或半固体的，也有用液体培养的，在液体中培养则需特殊的通气方法，如常用的离心机或转动机，不停地将培养基转动。 培养基须包括矿物质、糖、维生素及生长激素。在实际中用得最多的是MS培养基，或在此基础上加添少数激素。MS培养基的成分如下： 成分用量 NH4NO3硝酸铵400 Ca2•4H2O硝酸钙144 KNO3硝酸钾80 KH2PO4磷酸二氢钾125 MgSO4•7H2O硫酸镁72 KCL氯化钾65 NaFe—EDTA螫合铁25 H3BO3硼酸16 MnSO4•4H2O硫酸锰65 ZnSO4•7H2O硫酸锌27 KI碘化钾0.75 IAA吲跺乙酸2 Kinetin激动素0.04—0.2 Thiamin维生素B10.1 Nicotinicacid烟酸0.5 Pyridoxine维生素B60.5 Glycine甘氯酸2 Myo—inositol肌醇100 Casein—hydrolysate水解酪蛋白1000 Sugar蔗糖2% 琼脂l％ 蒸馏水1000ml PH值为5.0-6.0 配制培养基要在实验室内进行，各种用具、玻璃瓶或试管，都要严格消毒杀菌。最后配成的培养液注入玻璃瓶或试管内，再进行消毒，冷却后接入兰花外植体。接种工作应在无菌接种室或超净工作台上完成。 接种方法 1采取茎尖 兰属植物的组织培养以茎尖为最常用的材料。茎尖是分生组织最为活跃的生长点。选择健壮植株，将外层的叶和鞘叶剥去，把整个茎尖切下，浸入2.5％的漂白粉溶液或7％的次氯酸钠溶液中15—20分钟。然后取出用蒸馏水冲洗5—6次，将消毒液冲洗十净。在显微镜或扩大镜下将茎尖的生长点挑出，并即刻接种到玻璃管培养基上。 2.培养原球体 生长点一般经过4-6周的培养，产生出小而圆的原球体。将原球体取出，重新分切，l分为4，再入培养基内培养，经l—2个月又可长出原球体。同样，再行分割；重新培养。在几个月之内，就会获得大量的原球体。 3分化培养 把切割的原球体放在液体培养基中，放在旋转培养床上进行旋转培养。当其小块组织稍为长大后，转接在分化的培养基上，让它分化根和芽。 4.试管苗移植 当原球体组织分化根和芽，逐渐长大之后，就成为幼小植株。经一段培养，生长到一定程度就应该从玻璃瓶或试管中取出，移植到土壤或基质中了。移出试管后，用自来水将根上的培养基轻轻冲洗干净。栽培基质一般用水苔或蛭石。栽植后移入温室内培养。 在组织培养中要经过两个关：第一个关是分化培养基的生长激素和剂量，能否分化根和芽，完全取决于它。用什么激素和什么剂量，每种兰花都不一样，要经过摸索试验才能掌握。可以设计几种配方，进行对比实验来确定。第二个关是试管苗移出瓶后，往往不适应外界环境而大批死亡。要创造良好条件，在精心管理之下，才能获得良好结果。    |
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